Revista Industria Cosmética - Número 29

anticuerpos anti-his tag y anti-strep tag II respectivamente (Fig.2B y C). Los resultados anteriores indicaban que la SRHC de tipo XVII podía producirse eficazmente por secreción. Los resultados de MALDI-TOF MS verificaron además que el peso molecular exacto de SRHC tipo XVII es de aproximadamente 23,8-kDa (Fig.2D). También se pudo detectar un pico característico de colágeno con FT-IR (Fig.2E). Por último, llevamos a cabo la fermentación a escala de SRHC tipo XVII en 170801 y observamos un aumento de la concentración de proteína con la concentración bacteriana, lo que indica el éxito en la fermentación a escala. Además, los resultados de las pruebas de los productos finales, incluyendo SDS-PAGE, Western Blot, MALDI-TOF MS, FT-IR, fueron los mismos que llevamos a cabo en la fermentación de laboratorio y la secuencia de aminoácidos de SRHC tipo XVII fue totalmente la misma que diseñamos después de la verificación por secuenciación de aminoácidos. En conjunto, hemos realizado la fermentación a escala del colágeno recombinante de tipo XVII con estrategia secretora y el grado de homología con el colágeno humano nativo de tipo XVII es >90%. PRUEBA DE EFICACIA DE SRHC TIPO XVII COMO NUEVA MATERIA PRIMA PARA COSMÉTICOS Llevamos a cabo algunas pruebas de eficacia para evaluar si la SRHC tipo XVII podría utilizarse como nueva materia prima para cosméticos. En primer lugar, realizamos algunos experimentos relativos a la bioactividad celular, incluyendo la actividad de migración celular y la actividad de adhesión celular. Tal y como esperábamos, tras un diseño racional y una cuidadosa selección de la secuencia de aminoácidos del colágeno tipo XVII, el SRHC tipo XVII mostró una bioactividad incluso mayor que el colágeno humano a la hora de promover la migración y la adhesión celular (Fig. 3A). A nivel transcripcional, observamos un aumento significativo del nivel de expresión del gen que codifica la acuaporina 3 y una disminución del nivel de expresión de los genes que codifican la metaloproteinasa de matriz MMP3 yMMP9, que serían útiles para la hidratación y el mantenimiento del colágeno, respectivamente (Fig. 3B). Tras el Figura 2. Verificación del éxito de la producción secretora de SRHC tipo XVII en Pichia Pastories. A. Resultado de SDS-PAGE del sobrenadante de fermentación de 170801. 170801 fué el nombre de una de las células de levadura manipuladas durante el experimento. B. Resultado Western-blot del sobrenadante de fermentación de 170801 (tratado con anticuerpo anti-His tag). C. Resultado Western-blot del sobrenadante de fermentación de 170801 (tratado con anticuerpo anti-strep tag II). D. Resultado MALDI-TOF MS de SRHC Tipo XVII purificada. E. Resultados FT-IR de SRHC Tipo XVII purificada. F. Curva de crecimiento de Pichia Pastories modificada y nivel de expresión proteica correspondiente determinado por cuantificación UV en condiciones de fermentación a escala. 170801 Marker kDa 25 32 42 50 70 100 140 190 B C A 25 32 42 50 70 100 140 190 kDa Marker 170801 25 32 42 50 70 100 140 190 kDa Marker 170801 F D E OD 600 UV Quantification (g/L) 77 SEP/OCT 2023 INDUSTRIA COSMÉTICA 029 biotecnología cosmética